将本站设为首页    收藏本站    中文繁体
 
   
     微信公众号(强微铁三角养水)
微信公众平台:强微铁三角养水
微信公众号:qwtsjys
扫描此二维码关注我们
扫描此二维码关注强微铁三角养水
     微信公众号(畜禽版)
微信公众平台:宜春强微生物畜禽版
微信公众号:qwswxq
扫描此二维码关注我们
扫描此二维码关注宜春强微生物畜禽版
     论坛登录
     网站公告
      本网站为饲用乳酸菌特别网站,专门针对高端市场(饲料厂,大型养殖场,下游微生物添加剂公司)而开发的产品及应用网站,首先推出的产品将为乳酸粪肠球菌及其复合产品(复配芽孢杆菌,酵母菌等)
     每篇文章下面的网友评论只显示5条,要想看全部评论,请点击网友评论框右上角的“更多”
     乳酸菌产品文章点击排行
 您的位置:首页乳酸菌产品乳酸菌知识 》饲用乳酸菌的检测方法图文解释
     搜索帮助 更多选项
  热门搜索: 光合细菌 饲料配方 发酵豆粕 发酵豆渣 豆渣 潲水 发酵潲水 保健液制作 保健液 蛋鸡 木薯渣 发酵鸡粪 发酵床 发酵床养鸡
饲用乳酸菌的检测方法图文解释

2012/5/10 14:21:04   文章来源:原创   作者:强微生物   浏览次数:29566
【字号:  
双击鼠标
自动滚屏
乳酸菌详细检测操作过程
1. 作为饲用乳酸菌的用户,自己掌握乳酸菌的检测方法,尤其有必要
    饲用微生物添加剂效果在很大程度上取决于其中是否含有乳酸菌,因为乳酸菌是饲用微生物添加剂中无可争辩、当之无愧的主角菌;
    但实际上市场上的饲用微生物添加剂中极少含有乳酸菌,即便是厂家标示含有乳酸菌,也不要轻易相信,眼见为实,亲自检测一下是硬道理;
    乳酸菌在常温下贮存时,极易死亡失活,夏天往往数天就全部死光,乳酸菌的生产技术复杂,培养难度高,包埋保护技术要求高,这几个原因是造成市场上极少有乳酸菌的主要原因,总之,自己亲自检测验证是必要的,不然,可能您使用了多年的饲用微生物添加剂中,基本上就只有芽孢杆菌或酵母菌,根本没有乳酸菌,这种事非常多。
    而只有含有耐贮存,耐制粒的乳酸菌的饲用微生物添加剂,其效果就是绝非凡响!为什么说乳酸菌才是饲用微生物添加剂中无可争辩,当之无愧的主角,见网站相关文章的九条理由http://lac.hl99cn.com/show.asp?newsid=2070
    只有具备特殊的包埋保护的乳酸菌,才能在常温下贮存和使用,好的乳酸菌制剂甚至可以耐受饲料制粒的要求,例如“强微牌”乳酸粪肠球菌就是耐贮存,耐制料的乳酸菌制品。
 
下面介绍乳酸菌的检测方法——倾注法并产生透明圈的检测方法的原理,和操作技术
    针对用户大多数并不是微生物专业人员,编写本文时,特意使用浅显易懂的文字进行描述;
一. 本检测方法的原理
1.1 检测过程简述
乳酸菌悬液的制备
    将待检测的样品,准确称取0.5克,量取99.5mL无菌生理盐水稀释,(此次稀释了200倍,即0.5克样品,稀释到了100克水溶液),再加入灭菌玻璃珠20~30粒,于250mL三角瓶中,置于振荡器或摇床上剧烈摇晃30分钟以上,目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散,分散开来。
稀释到适当倍数
    根据所待检测的样品可能的乳酸菌含量,进行适当的稀释操作,例如如果估计样品的含乳酸菌活菌数为200亿/克左右,则建议稀释2亿倍,这样将来在90mm平板上培养时,会长出大约100个乳酸菌落,比较便于计数,总之,控制平板培养皿上的乳酸菌落数量在30~300个的范围内,比较便于计数。
    我公司“强微”牌乳酸粪肠球菌系列产品,含乳酸菌活菌数的分析保证值均在100~300亿/克范围内(刚出厂的则在240--720亿/克以上),所以,建议稀释2--3亿倍以上即可。
    稀释方法用无菌生理盐水,在250mL三角瓶中进行稀释,方法见后述。
倒制平板,即接种
    倒制平板在超净工作台上进行,养殖户可使用一盏简单的酒精灯和一个干净的操作台就可操作;
    即事先配制好,并灭菌处理的检测用琼脂培养基,在水浴锅内保持50℃的温度,使琼脂培养基呈溶解状态,置于操作台旁边备用;(养殖户可先不从压力锅中取出,在压力锅维持一定的温度,从而也不会凝固)
    取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿(也叫平板)若干、1mL移液管若干,置于操作台上备用;(养殖户的培养皿平板可在压力锅中进行蒸汽灭菌处理)
    在无菌条件下(打开超净工作台无菌风,或养殖户点上酒精灯),将稀释了2亿倍的乳酸菌液,用移液管移取1mL ,于培养皿中,再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右(倒培养基时,估计能覆盖满平皿的液体量即可),然后,盖好培养皿盖,轻轻转动平皿,原地转几圈,使培养基液与乳酸菌液混合均匀,等数分钟后,待培养基凝固后,可移入培养箱中进行培养;
培养箱中进行培养
    将前面倒制好的平板,倒转(即盖子在下面),放于培养箱中,于33℃温度下,培养2~3天,待培养皿平板中长出比较明显的,带有透明圈的菌落时,即可进行计数,得出检测结果。
1.2 检测的原理介绍
   本文介绍的乳酸菌检测方法,是我公司用来检测乳酸粪肠球菌的专利技术之一,检测乳酸菌的培养基配方如下:
    用于检测乳酸菌的培养基配方为:蛋白胨15g,牛肉膏5g,葡萄糖20g,氯化钠5g,碳酸钙10g,琼脂粉10g,水1000ml,115~121℃灭菌20min,灭菌后放置水浴50℃保温备用。
    可以看到,与普通的琼脂培养基配方有两个比较明显的区别:
    ① 其中琼脂的用量只有1%,比常规琼脂培养基的2%用量少了一半,目的是降低琼脂凝固温度,为了在倒制平板时,使培养基能在较低的温度下与热敏性的乳酸菌混合,并一直呈溶解状态,混合均匀后,才慢慢凝固;
    ② 同时,添加了1%的碳酸钙,由于碳酸钙难溶于水,所以,加入碳酸钙后的琼脂平板培养基为混浊状态,为的是在将来培养乳酸菌时,乳酸菌在培养过程中产生乳酸,把菌落周围的难溶性的碳酸钙溶解,成为可溶性的乳酸钙,并使菌落周围的培养基变得透明,在菌落周围产生透明圈,从而判断其为乳酸菌。
 
二. 检测仪器设备要求
2.1 正规的实验室检测乳酸菌需要如下仪器和设备:
    ① 恒温培养箱;1000~2000元/台;
    ② 恒温干燥灭菌箱;1000~2000元/台;
    ③ 电子天平;200元/台左右;
    ④ 灭菌锅;医用的,或手提式高压灭菌锅;500元/台左右;
    ⑤ 玻璃仪器(灭菌的9cm培养皿,10mL、1mL的吸管,250mL三角瓶,玻璃珠一包等)
    ⑥ 显微镜;必要时观察计数乳酸菌总数;检测活菌几乎不需要它。
    ⑦ 超净工作台;用于接种操作;
    ⑧ 其他如橡皮筋,牛皮纸或报纸;
    ⑨ 记号笔
 
2.2 养殖户或饲料厂简单地检测乳酸菌,需要的最简单的仪器和设备
    ① 恒温培养箱;1000~2000元/台;
    ② 酒精灯;代替正规实验室的超净工作台,在火焰上接种操作;
    ③ 天平;最简单的小天平,数十元一台;
    ④ 压力锅;家庭蒸饭用的就行(但不是电饭煲);
    ⑤ 一个干净的操作台面;
    ⑥ 玻璃仪器(灭菌的9cm培养皿,10mL、1mL的吸管各数根,250mL三角瓶10个以上,玻璃珠一包等),这几样加起来也就100多元;
    ⑦ 其他如橡皮筋,牛皮纸或报纸;
    ⑧ 记号笔
 
三. 药品
    无论是正规实验室,还是养殖户或饲料厂非正规检测,都需要以下药品:蛋白胨,酵母膏,葡萄糖,氯化钠,碳酸钙。
 
四、针对正规实验室的检测方法
4. 检测步骤(针对正规实验室)
4.1 先准备干热灭菌的物品(针对正规实验室)
    干热灭菌是指在恒温干燥灭菌箱中,以140℃以上的干热空气,对箱内物品进行消毒灭菌,主要用于玻璃仪器的灭菌处理。
    用报纸(最好有牛皮纸)和橡皮筋等包扎好如下物品:“培养皿、1mL移液管”;根据要检测的样品的数量,决定包扎的玻璃仪器的数量。包扎效果见图示。
    以及准备好相应数量的250mL三角瓶,一个样品需要至少4个三角瓶;
    将上述三角瓶,以及包扎好的培养皿,移液管等,放入恒温干燥灭菌箱中,于140℃以上灭菌3小时以上。备用。
 
4.2 再准备好湿热灭菌的物品(针对正规实验室)
    湿热灭菌是指在灭菌锅内,通过加热产生饱和压力水蒸汽,对物品进行渗透灭菌的过程,主要用于配制好的培养基灭菌,无菌水制作等的消毒处理。
① 平板(或叫培养皿)培养基的配制
    用于检测乳酸菌的培养基配方为:蛋白胨15g,牛肉膏5g,葡萄糖20g,氯化钠5g,碳酸钙10g,琼脂粉10g,水1000ml,溶解于250或500mL三角瓶中,再放入灭菌锅内消毒灭菌处理,115~121℃灭菌20min,灭菌后放置水浴50℃保温备用。
② 无菌生理盐水的配制
    通常检测一个样品,需要用到至少400毫升无菌生理盐水,据此,计算您的需要量,配制好后,进行灭菌处理。
    生理盐水含氯化钠0.85%,即称取0.85克氯化钠,溶解于100毫升水中即可,然后,放于灭菌锅内灭菌处理。备用。
 
4.3 样品的制备(针对正规实验室)
4.3.1 乳酸菌悬液的制备
    将待检测的样品,准确称取0.5克,量取99.5mL无菌生理盐水稀释,(此次稀释200倍),再加入灭菌玻璃珠20~30粒,于250mL灭菌三角瓶中,在摇床上于180rpm转速下,摇晃30分钟以上,目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散,分散开来。
4.3.2 用生理盐水稀释到2亿倍
    用1mL的移液管,移取1mL 上述菌悬液,移入250mL灭菌三角瓶中,再加入99mL无菌生理盐水,摇晃均匀,即此次操作稀释了100倍,前述乳酸菌悬液的制备时,已稀释了200倍,则一共稀释了2×104倍;
   再用新的移液管和新的250mL灭菌三角瓶,取上述稀释液,再重复上述操作,再稀释100倍,则稀释了2×106倍;
   再用新的移液管和新的250mL灭菌三角瓶,取上述稀释液,再重复上述操作,再稀释100倍,则稀释了2×108倍;即2亿倍。
 
4.4 倒制平板,即接种(针对正规实验室)
    倒制平板在超净工作台上进行,以保持无菌环境中操作;
    把事先配制好,并灭菌处理后的检测用培养基,在水浴锅内保持50℃的温度,置于操作台旁边备用;
    取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿(也叫平板)若干、1mL移液管若干,置于操作台上备用;
    在无菌条件下(打开超净工作台无菌风),将稀释了2亿倍的乳酸菌液,用移液管移取1mL ,于培养皿中,再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右(倒培养基时,估计能覆盖满平皿的液体量即可),然后,盖好培养皿盖,轻轻转动平皿,原地转几圈,使培养基液与乳酸菌液混合均匀,等数分钟后,待培养基凝固后,可移入培养箱中进行培养;
4.5 培养箱中进行培养
    将前面倒制好的平板,放于培养箱中,于33℃温度下,培养2~3天,待培养皿平板中长出比较明显的,带有透明圈的菌落时,即可进行计数,得出检测结果。
 
4.6 计数
    从培养箱中取出培养好的平板,用记号笔为计数工具,在平板的背面进行计数,如室内光线不好,必要时,将培养皿对着灯光进行计数;
    在培养好的平板上,凡是带有透明圈的菌落,才算是乳酸菌菌落,不然,就不是乳酸菌,我们计数,也就是计算这些带有透明圈的菌落数。
    每计数一个菌落,就用记号笔在平板背面相应位置点一下,留下一个记号痕迹,一直将平板上所有的带有透明圈的菌落全部数完为止。
    记录计数值。
 
4.7. 结果计算
    计算公式:
    样品中含活的乳酸菌数量(亿个/克,或亿cfu/g)= 计数值×2
 
五、针对养殖户或中小饲料厂的简单检测方法
5. 检测步骤(针对养殖户或中小饲料厂
    养殖户或中小饲料厂,如果没有干燥灭菌箱,可以将全部需要灭菌消毒的物品,都用湿热灭菌法消毒,即都使用蒸饭用的压力锅消毒即可。
    注意:压力锅消毒时,要事先在压力锅内垫上一个铝垫片,支起一个内胆,在内胆中放置待消毒物品,垫片处放清水作为蒸汽发生用水,具体见图未:
    湿热灭菌是指在压力锅内,通过加热产生饱和压力水蒸汽,对物品进行渗透灭菌的过程。
 
5.1 再准备好压力锅中需要灭菌的物品(针对养殖户或中小饲料厂
① 平板(或叫培养皿)培养基的配制
    用于检测乳酸菌的培养基配方为:蛋白胨15g,牛肉膏5g,葡萄糖20g,氯化钠5g,碳酸钙10g,琼脂粉10g,水1000ml,溶解于250或500mL三角瓶中,再放入压力锅内消毒灭菌处理,上汽后保持灭菌25min,灭菌后备用。
    因为倒制平板时,需要溶解状态的培养基,而养殖户往往没有水浴锅来保持培养基的温度达到45~50℃,这是个问题,建议养殖户,在最后来操作这一步,即所有其他的东西都准备好后,最后来灭菌平板培养基,待它冷却到手感微烫时,直接用来倒制平板。
② 无菌生理盐水的配制
    通常检测一个样品,需要用到至少400毫升无菌生理盐水,据此,计算您的需要量,配制好后,进行灭菌处理。
    生理盐水含氯化钠0.85%,即称取0.85克氯化钠,溶解于100毫升水中即可,然后,放入压力锅内消毒灭菌处理,上汽后保持灭菌25min,灭菌后备用。
其他需要压力锅灭菌处理的物品
    用报纸(最好有牛皮纸)和橡皮筋等包扎好如下物品:“培养皿、1mL移液管”;根据要检测的样品的数量,决定包扎的玻璃仪器的数量。包扎效果见图示。
    以及准备好相应数量的250mL三角瓶,一个样品至少需要4个三角瓶;
    将上述三角瓶,以及包扎好的培养皿,移液管等,放入压力锅内消毒灭菌处理,上汽后保持灭菌25min,灭菌后备用。
 
5.2 样品的制备(针对正规实验室)
5.2.1 乳酸菌悬液的制备
    将待检测的样品,准确称取0.5克,量取99.5mL无菌生理盐水稀释,(此次稀释200倍),再加入灭菌玻璃珠20~30粒,于250mL灭菌三角瓶中,养殖户没有摇床,只能辛苦点,用手握好三角瓶,用力摇晃30分钟以上,目的是将粘连在一起的乳酸菌细胞打散,分散开来。
5.2.2 用生理盐水稀释到2亿倍
    用1mL的移液管,移取1mL 上述菌悬液,移入250mL灭菌三角瓶中,再加入99mL无菌生理盐水,摇晃均匀,即此次操作稀释了100倍,前述乳酸菌悬液的制备时,已稀释了200倍,则一共稀释了2×104倍;
   再用新的移液管和新的250mL灭菌三角瓶,取上述稀释液,再重复上述操作,再稀释100倍,则稀释了2×106倍;
   再用新的移液管和新的250mL灭菌三角瓶,取上述稀释液,再重复上述操作,再稀释100倍,则稀释了2×108倍;即2亿倍。
 
5.3 倒制平板,即接种(针对正规实验室)
    养殖户没有超净工作台,倒制平板在酒精灯的火焰旁边进行,但必须有一个比较干净的操作台,如瓷板操作台面上操作,以保持无菌环境中操作;
5.3.1 保持平板培养基的溶解状态
    因为倒制平板时,需要溶解状态的培养基,而养殖户往往没有水浴锅来保持培养基的温度达到45~50℃,这是个问题,建议养殖户,在最后来操作这一步,即所有其他的东西都准备好后,最后来灭菌平板培养基,待它冷却到手感微烫时,直接用来倒制平板。
5.3.2 倒平板操作
    取事先干热灭菌处理后的90mm培养皿(也叫平板)若干、1mL移液管若干,置于操作台上备用;
    在无菌条件下(点上酒精灯,尽量在避风处,空气干燥清爽的环境中,以及比较干净的瓷板操作平台上操作),将稀释了2亿倍的乳酸菌液,用移液管移取1mL ,于培养皿中,再在此培养皿中倒入前述保持溶解状态的检测培养基液15mL左右(倒培养基时,估计能覆盖满平皿的液体量即可),然后,盖好培养皿盖,轻轻转动平皿,原地转几圈,使培养基液与乳酸菌液混合均匀,等数分钟后,待培养基凝固后,可移入培养箱中进行培养;
    注意以上操作,尽量在酒精灯的火焰旁边操作。
    待平板中的培养基,冷却凝固后,移入培养箱中进行培养。
 
5.4 进行培养
    将前面倒制好的平板,放于培养箱中,于33℃温度下,培养2~3天,待培养皿平板中长出比较明显的,带有透明圈的菌落时,即可进行计数,得出检测结果。
    如果养殖户没有培养箱,也可以在仔猪或雏鸡保温箱中进行培养,热源采用红外灯热源,但注意要使用干净的箱子或容器来培养。
 
5.5 计数
    从培养箱中取出培养好的平板,用记号笔为计数工具,在平板的背面进行计数,如室内光线不好,必要时,将培养皿对着灯光进行计数;
    在培养好的平板上,凡是带有透明圈的菌落,才算是乳酸菌菌落,不然,就不是乳酸菌,我们计数,也就是计算这些带有透明圈的菌落数。
    每计数一个菌落,就用记号笔在平板背面相应位置点一下,留下一个记号痕迹,一直将平板上所有的带有透明圈的菌落全部数完为止。
    记录计数值。
 
5.6. 结果计算
    计算公式:
    样品中含活的乳酸菌数量(亿个/克,或亿cfu/g)= 计数值×2
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 


上一篇:什么是科学合理的乳酸菌检测方法 下一篇:强微高活力高密度乳酸粪肠球菌研发技术背景

  相关文章  
(视频)钟总关于正确使用抗生素,及与乳酸菌的关系的演讲 (2013-7-6)
强微固态发酵培养工艺在乳酸菌生产技术上的优势 (2012-9-11)
乳酸菌是饲用微生物中当之无愧的主角菌种 (2012-8-20)
乳酸菌——您的饲料中添加了吗? (2012-8-19)
目前国内市场上饲料用乳酸菌的现状 (2012-7-3)
国内乳酸菌生产工艺技术有待提高 (2012-7-2)
确实保障用户在使用乳酸菌中的利益——规范的分析保证值 (2012-5-26)
什么是科学合理的乳酸菌检测方法 (2012-5-13)
强微高活力高密度乳酸粪肠球菌研发技术背景 (2012-5-3)
如何判断饲用微生物添加剂品质的好坏 (2012-5-3)
强微乳酸粪肠球菌性价比如何 (2012-5-3)
高活力耐热型粪肠球菌在代替抗生素方面的优势地位,和相关依据 (2012-5-3)
什么是乳酸菌? (2012-5-3)
乳酸菌的作用机制 (2012-5-3)
什么是原籍型乳酸菌,有什么益处 (2012-5-3)
微生物饲料添加剂规范使用的研究 (2011-5-3)
动物胃肠道菌群与其免疫功能和健康的关系 (2011-5-3)
  已有网友评论 5 条  
以下为网友的评论:(第 1-5 条评论) 点此查看评论全文...
 评论网友:宜春   评论时间:2016/10/8 8:58:18
  您好,一起灭菌,没有问题的;
 评论网友:请教   评论时间:2016/9/27 15:28:55
培养基和碳酸钙是分开来灭菌最后倒平板时再合并在一起还是一起灭菌?
 评论网友:请教   评论时间:2016/9/27 9:30:10
培养基和碳酸钙是分开来灭菌最后倒平板时再合并在一起还是一起灭菌?
 评论网友:宜春   评论时间:2015/5/30 21:02:41
自然PH。
 评论网友:495650828   评论时间:2015/5/30 13:59:35
培养基的PH值调到多少呢
点此查看评论全文...
  发 表 评 论  
您的网名:
评论内容:
  
宜春强微生物科技有限公司敬告网友
1、本文章评论均系网友自行发布,其内容未经证实,仅代表发布者个人观点,不代表本站观点。如因其言论而引发任何纠纷,由发布者本人承担相应的法律责任。
2、严禁利用本文章评论诽谤、攻击他人,或发表煽动性言论,否则本站将限制放行,并保留追究相关责任的权利。

关闭窗口
copyright © 2021-2030 版权所有:宜春强微生物科技有限公司 All rights reserved.
  宜春强微旗下网站:畜牧水产养殖用菌官网:www.qw99cn.com   环保和水质处理菌剂官网:www.hl99cn.com  
网管邮箱:webmaster@qw99cn.com  技术业务咨询邮箱: icomming@163.com  

电话:0795-3546882  3546883(传真)  18079585500(陈)  18079586818(袁)  19979509072(唐)  18162218578(游)  邮编:336000
赣ICP备08100270号-2