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斑节对虾红体病细菌性病原的初步研究

2012/6/5 16:28:45   文章来源:原创   浏览次数:28202
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斑节对虾红体病细菌性病原的初步研究
刘 虽 王 侃 彭锦新 赵俊和 张小清 (深圳沙头角动植物检疫局,518081)

 摘 要
  从患“红体病”的斑节对虾中分离到8个菌株,通过致病力试验证实其中两个菌株是引起斑节对虾“红体病”的主要病原,使对虾死亡率分别达到刀%和叨%。根据生化试验,确定这两个菌株分别是嗜水气单胞菌和副溶血弧菌。抗药性实验的结果表明,嗜水气单胞菌菌株对强力霉素较为繁感,副溶血弧菌菌株对氟听酸、红霉素、青霉素和强力霉素较为敏感。
  关键词 斑节对虾 红体病 病原菌 嗜水气单胞菌 副溶血弧菌
  1997年5—7月间,深圳的许多对虾养殖场因暴发严重的斑节对虾(Penaeus monodon)“红体病”而致对虾大量死亡,造成重大的经济损失。该病病程长,累积死亡率高,在虾苗及成虾中都有发生。我们采集了病虾的样品。从中分离出有一定致病力的菌株,并对病原菌进行了鉴定、人工感染试验和病原菌抗药性试验,对该病的病原进行了初步探讨。

 材料与方法

 一、材料
  1.试验用病虾采自深圳东部南澳、坝光等地的对虾养殖场。患病虾体色暗红、软壳,游动无力,不摄食,潜伏于岸边,反应迟钝。解剖观察可见空肠,肝脏呈浅黄色或深竭色,肌肉无弹性。
  2.试验用健康虾从深圳沙头角田心市场购得,体长8-14cm。
  3.试验用培养基为美国DIFCO公司生产的脑心浸液琼脂(BHIA)和(中国人民解放军)浙江省军区后勤部卫生防疫检验所生产的TCBS琼脂。
  4.细菌生化鉴定采用的是(中国人民解放军)浙江省军区后勤部卫生防疫检验所生产的生化微量管。
  5.本试验所作药敏试验采用的是(中国人民解放军)浙江省军区后勤部卫生防疫检验所生产的药敏试纸。
 二、方法
  1.病原菌的分离方法:取症状典型的患病虾,先用无菌生理盐水擦净其体表,再用70%的酒精棉球反复擦拭头胸甲后部和背部的连接处,然后在节处穿刺取血淋巴,划线接种于BHIA琼脂和hBS琼脂平板上,30℃恒温培养24h后,挑取形态一致的优势菌落,进行纯培养。
  2.病原菌的鉴定:病原菌的鉴定根据(简明第八版伯杰细菌鉴定手册)(霍尔特主编,1988)和 ‘Bactenal Disease of Fish(edited by Valerie Inglis etal.1993)所述的方法及鉴定标准进行。在BHfa脂平板及TCBS平板上培养2d后观察菌落的形态。取平板上新鲜培养物,经革兰氏染色后,用油镜观察细菌形态。
  3.菌株致病力试验:致病力试验采用浸浴法。取10d菌液加人到10(XXha干净海水中,然后放10尾健康虾;同时用平板计数法测定菌液的实际浓度。每个菌株设1个平行组。另设一组不加菌液的作为对照。用充氧泵充气,保证水中有充足的溶解氧。试验开始后每隔lh观察并记录发病死亡情况,并选择有典型病状的病虾重新进行细菌的分离,以确定其致病力。
  4.药物敏感试验:用涂布法将分离出的菌株接种到BHIA平板或TCBS平板上,然后将药敏纸片贴在培养基上。30CC培养18h后测定抑菌圈的直径。 结 果

 一、致病力试验
  采用浸浴法进行人工感染,结果表明(表1),用编号为9715B和9716B的菌株浸浴的斑节对虾在96h时的累积死亡率分别为70%和90%。感染虾表现出与自然患病虾相同的症状:反应迟钝,体色暗红,不摄食,壳发软。用其它菌株菌液浸浴的斑节对虾和对照组都没有出现死亡。
  2.病原菌的分离和鉴定 对2个有较强致病力的菌株97 SB、9716B以及从人工感染的斑节对虾体内分离出的2个菌株9715b、9716b进行生化鉴定(表2),结果显示, 9715B和 9715b为嗜水气单胞菌(Aeromonas by drophila),9716B和9716b为副溶血弧菌(VibriO pa。hemolytic。)。
  3.药物敏感试验结果
  测定了分离株对8种常见药物的敏感性(表 3)。结果显示:97 15B对强力霉素最为敏感;9716B 对氟呶酸、红霉素、青霉素和强力霉素都非常敏感。

 讨 论
  泰国、日本、中国台湾等地养殖的斑节对虾和日本对虾都有“红体病”发生(Chien等,1985; Lightner等,1985;Adams,1991;Nakan等,1994),病原有真菌、弧菌或病毒。泰国报道过病原为细菌的“红体病”,在体重为地以下的对虾发病时,可用土霉素治疗;体重为2%以上的对虾发病,只能用改善水质和池塘底质的方法行控制,抗生素无济于事。在深圳东部地区对虾养殖场暴发“红体病’则还是首次。
  1997年以前,深圳地区暴发的斑节对虾疾病以白斑病为主,临床症状清现为体表布满白斑,而患“红体病”的斑节对虾体表呈现明显的暗红色,白斑极少,甚至没有。本试验结果表明,嗜水气单胞菌和副溶血弧菌是引起这次“红体病”暴发的原因之一,但“红体病”仅仅是由这两种细菌所引起,还是由病毒引起,或是由细菌和病毒共同感染所引起,以及这种无白斑症状的“红体病”与有明显症状的“白斑病”之间的关联,还需做出一步的研究。
  鸣谢 本试验承深圳动植物检疫局水生动物病重点实验室的江育林研究员指导并审稿,在此谨致谢忱!

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